病毒载体因其在高效递送CRISPR组分方面的优势，已成为基因治疗研究中的关键工具，尤其适合转染难度较大的分化细胞。不同类型的病毒可以实现有效的体内递送，但其生产工艺复杂和成本较高，限制了其广泛应用。与质粒相比，病毒载体的生产需要额外步骤：首先将CRISPR组分克隆到转移载体中，再将其包装成病毒颗粒，这一劳动密集型的过程加大了大规模生产的难度。

目前主流的CRISPR递送载体包括慢病毒、腺相关病毒（AAV）和腺病毒。它们在转导效率、免疫原性和载体容量等方面各有特点，需根据实验目标做出合适选择。

基于慢病毒的递送方式

慢病毒因其与电穿孔相当的基因递送效率，成为CRISPR组分递送的热门选择，特别是在大规模CRISPR文库筛选中展现出明显优势。其主要特点是能够将转基因整合至宿主基因组，实现长期表达，这对过表达实验具有重要意义。然而，基因组整合带来的插入突变风险限制了其在临床体内的应用。目前，慢病毒多用于基础研究和体外基因修饰，如FDA已批准的CAR-T癌症疗法和治疗β-地中海贫血症的Zynteglo。

需要注意的是，在递送过程中文Cas9的持续表达可能引起脱靶效应，而可诱导表达系统或整合酶缺陷型慢病毒（IDLV）能有效缓解此问题，其基因组整合率降低约500倍。虽然其转导效率低于常规慢病毒，但在体外和体内神经元中的递送效率与常规载体相当，展现出治疗中枢神经系统疾病的潜力。

基于AAV的递送方式

AAV递送系统目前面临两大技术瓶颈：首先是载体容量限制（约42kb），远低于慢病毒的装载能力；其次转导效率相对较低。针对容量问题，研究者提出了多种解决方案，包括采用序列长度较小的SaCas9；双载体共递送策略（分别装载Cas9和gRNA）；SpCas9分割表达技术，通过两个载体递送SpCas9片段，形成完整的功能性SpCas蛋白。

AAV系统具有独特的临床优势，通过多样化的血清型选择实现组织特异性靶向，结合衣壳定向进化技术（通过体外/体内筛选优化衣壳蛋白），能进一步提升递送的精准度和治疗效果。尽管目前尚无基于AAV的CRISPR疗法获得FDA批准，AAV平台在其他基因药物中已成功应用，例如治疗脊髓性肌萎缩的Zolgensma®，其商业化体现了CRISPR-AAV疗法临床转化的巨大潜力。

基于腺病毒的递送方式

腺病毒基因递送系统在安全性方面表现突出，其非整合特性已经通过多项临床试验验证，是替代慢病毒的重要选择。相较于AAV和慢病毒载体，腺病毒具有显著的装载能力提升，但其高免疫原性可能干扰基因编辑的效果。当前应用最广泛的Ad5血清型依赖CAR受体介导细胞转导，这限制了其组织适用性。最新研发的Ad5/F35嵌合体突破了CAR受体依赖性，同时gutless腺病毒载体（仅保留必要包装序列）不仅降低了免疫原性，还扩展了载体容量（可达33kb），非常适合表达较长的或多个转基因。

在临床转化方面，腺病毒载体展现出多重突破。例如，EBT-101作为首个静脉注射型CRISPR-HIV治疗载体目前已启动I/IIa期临床试验；在肿瘤治疗领域，多项临床前研究证实其在靶向实体瘤中的优势。虽然FDA已批准首款腺病毒基因疗法，但基于CRISPR的腺病毒疗法仍处于临床实验阶段。

总的来说，基因治疗正在快速发展，尊龙凯时作为行业引领者，积极推动该领域的研究与应用，以促进更多创新性的治疗方案的出现。